Veterinarski arhiv, Vol. 89 No. 1, 2019.
Izvorni znanstveni članak
https://doi.org/10.24099/vet.arhiv.0106
Kloniranje, ekspresija i karakterizacija paraflagelarnog gena Rod 2 bičaša Trypanosoma evansi
S. Sivajothi
orcid.org/0000-0002-1720-9308
; Department of Veterinary Parasitology, Sri Venkateswara Veterinary University, Tirupati, India
V. C. Rayulu
; Department of Veterinary Parasitology, Sri Venkateswara Veterinary University, Tirupati, India
P. M. Kondaiah
; Department of Veterinary Parasitology, Sri Venkateswara Veterinary University, Tirupati, India
D. Sreenivasulu
; Department of Veterinary Microbiology, Sri Venkateswara Veterinary University, Tirupati, India
CH. Srilatha
; Department of Veterinary Pathology, Sri Venkateswara Veterinary University, Tirupati, India
D. V. R. Sai Gopal
; Department of Virology, Sri Venkateswara University, Tirupati, India
B. Bhaskar Reddy
; RARS, ANGRAU, Tirupati, India
B. Sudhakara Reddy
; Department of Veterinary Medicine, Sri Venkateswara Veterinary University, Tirupati, India
Sažetak
Paraflagelarni štapić glavna je strukturna komponenta tripanosomskog biča i dio je kompleksa filamenaza koji teku paralelno s aksonemom duž biča. Istraživanje je provedeno kako bi se ispitalo postojanje paraflagelarnog gena Rod 2 (PFR2) u bičaša Trypanosoma evansi koji invadira goveda u Indiji. Lokalni izolat T. evansi prikupljen od prirodno invadiranih krava umnožen je u Wistar štakora. Komplementarna DNA (cDNA) sintetizirana je iz RNA obrnutom transkripcijom iz stanica neinvadiranih nositelja T. evansi parazita. Pročišćeni PCR produkt (gen PFR2 bičaša T. evansi) kloniran je u vektorski sustav pTZ57R/T. Nukleotidna sekvencija gena PFR2 bičaša T. evansi, izolat S.V.V.U. (pristupni broj KT277497) dobivena u ovom istraživanju pokazala je 100 %-tnu sličnost s izolatom T. evansi China i 99 %-tnu s izolatom T. evansi Izatnagar i Bikaner. Rekombinantni protein ponovno je kloniran u sustavu pET 32a i prikazan u sustavu BL21 (DE3) pLysS. Gen PFR2 bičaša T. evansi, izolat S.V.V.U. dalje je karakteriziran određivanjem proteinskog profila metodama SDS-PAGE i Western blotting. Indirektni test ELISA optimiziran je za dokaz titra specifičnih protutijela za rekombinantni protein gena PFR2 bičaša T. evansi. U kinetoplastida gen PFR2 izrazito je očuvan. Stoga bi se gen PFR2 mogao upotrijebiti za cjepivo te kao dijagnostički antigen.
Ključne riječi
Andhra Pradesh, India; Trypanosoma evansi; goveda; paraflagelarni gen PFR2; kloniranje i ekspresija
Hrčak ID:
217711
URI
Datum izdavanja:
8.3.2019.
Posjeta: 1.062 *