Original scientific paper
https://doi.org/10.2478/10004-1254-60-2009-1915
Karboksilesteraza djelomice hidrolizira estere gama-butirobetaina u serumu štakora
Lida Bagdoniené
; Department of Biochemistry and Biophysics, Vilnius University, Vilnius, Lithuania
Danutė Labeikytė
; Department of Biochemistry and Biophysics, Vilnius University, Vilnius, Lithuania
Ivars Kalviņš
; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia
Veronika Borutinskaitė
; Department of Developmental Biology, Institute of Biochemistry, Vilnius, Lithuania
Aleksandrs Prokofjevs
; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia
Pēteris Trapencieris
; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia
Benediktas Juodka
; Department of Biochemistry and Biophysics, Vilnius University, Vilnius, Lithuania
Nikolajs Sjakste
; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia
Abstract
Premda su poznati već neko vrijeme, esteri gama-butirobetaina (GBB) i srodni spojevi nisu dobili mnogo pozornosti u znanstvenoistraživačkoj zajednici, a njihova fiziološka funkcija i dalje je nerazjašnjena. U ranijem smo istraživanju HPLC-metodom otkrili enzimsku aktivnost GBB-esteraze u serumu štakora rabeći umjetni supstrat ovoga enzima, tj. fenilirani gama-butirobetain. Cilj ovoga istraživanja bio je razviti pretragu koja će omogućiti spektrofotometrijsko ili kolorimetrijsko određivanje reakcijskih produkata nastalih aktivnošću GBB-esteraze te utvrditi koji pojedinačni proteini u serumu štakora posjeduju aktivnost GBB-esteraze. U tu je svrhu sintetiziran gama-butirobetain 1-naftil ester. Njegovom hidrolizom otpušta se 1-naftol koji povećava optičku apsorbanciju na 322 nm. Pokazali smo da u hidrolizi GBB 1-naftil estera u 1-naftol u serumu štakora sudjeluje GBB-esteraza. Pokušali smo pročistiti enzim iz štakorskoga seruma. Kombinacijom DEAE sefaroze pri pH 4,2 i afinitetne kromatografije s prokainamidom dobili smo 68-erostruko povećanje aktivnosti ovoga enzima. Razdvajanjem bjelančevina iz frakcije s pomoću 2D elektroforeze te naknadnom spektrometrijom masa utvrđeno je da u serumu štakora esteraznu aktivnost prema gama-butirobetainu kao supstratu djelomice provodi karboksilesteraza.
Keywords
2D elektroforeza; HPLC; kolorimetrija; 1-naftol; spektrofotometrija
Hrčak ID:
38386
URI
Publication date:
12.6.2009.
Visits: 2.005 *