Original scientific paper

Primjena kulture stanica prednjeg režnja hipofize u toksikološkim istraživanjima

Vesna Zechner-Krpan
Jasna Kniewald
Zlatko Kniewald

Abstract

Atrazin, selektivni s-triazinski herbicid, danas se rabi u velikim količinama za zaštitu kukuruznih polja, a zbog svoje liposolubilnosti i perzistentnosti u okolišu ulazi u hranidbeni lanac. In vitro sustavi tkiva i organa sisavaca uz in vivo pokuse još i danas su pretežite tehnike u toksikologiji koje se pouzdano primjenjuju. Potrebe za smanjenjem broja pokusa na životinjama dovele su do intenzivna razvoja tehnika sa životinjskim stanicama, bilo da se radi o primarnim kulturama ili o staničnim linijama. Primarne kulture stanica središnjega živčanog sustava nisu do danas doživjele punu primjenu. Primjena životinjskih stanica mnogo je jeftinija tehnika koja omogućuje provođenje istodobnog ispitivanja na velikom broju uzoraka.
Cilj istraživanja bio je ispitati toksičnost atrazina u in vitro uvjetima na modelu kulture stanica hipofize, koje su odgovorne za normalno funkcioniranje reprodukcijskog procesa. U radu se dobrom izolacijskom metodom i visokim stupnjem uspješnog uspostavljanja kulture stanica, mogao pratiti utjecaj atrazina na razini staničnih promjena. Stanice raspršene kolagenazom u suspenziji s medijem 199 i 10%-tnim telećim serumom prihvatile su se za plastičnu podlogu unutar 24 sata. Elektronskom mikroskopijom nađeni su različiti tipovi stanica. Nakon produljene kultivacije, najveći broj stanica stvorio je male kolonije s uočljivim vezama između stanica. Stanice su pokazale dobru enzimsku aktivnost pri pretvorbi testosterona u aktivni metabolit 5alfa-dihidrotestosteron. Imunohistokemijskim metodama utvrđene su stanice koje sintetiziraju hormone što stimuliraju razvoj folikula (FSH) i hormone luteinizacije (LH). Atrazin je dodan kulturi stanica hipofize u koncentracijama 5–50 µg/ml medija koji je sadržavao 3x105 stanica. Tijekom 24, 48 i 72 sata nađena su značajna smanjenja broja živih stanica, od 36 do 46%. Učinci su ovisili o dozi atrazina. Rezultati upućuju na to da se kulture stanica adenohipofize mogu uspješno rabiti u budućim istraživanjima toksičnosti različitih tvari radi smanjenja ili zamjene in vivo pokusa na životinjama.

Keywords

atrazin; gonadotropne stanice; hipofiza; in vitro sustav; jednoslojna kultura; ksenobiotici; kulture stanica; pokusne životinje; toksikološka istraživanja; vitalnost stanica

Hrčak ID:

3279

URI

https://hrcak.srce.hr/3279

Publication date:

1.4.1999.

Article data in other languages: english

Visits: 2.822 *