Izvorni znanstveni članak
https://doi.org/10.17133/ftb.54.01.16.4122
Pročišćavanje i karakterizacija α-amilaze izolirane iz soja Anoxybacillus sp. AH1, stabilne pri visokim temperaturama i u prisutnosti detergenata
Ömer Acer
; Faculty of Science, Dicle University, Diyarbakır, Turkey
Fatma Matpan Bekler
; Faculty of Science, Dicle University, Diyarbakır, Turkey
Hemşe Pirinççioğlu
; Faculty of Science, Dicle University, Diyarbakır, Turkey
Reyhan Gül Güven
; Ziya Gökalp Faculty of Education, Dicle University, Diyarbakır, Turkey
Kemal Güven
; Faculty of Science, Dicle University, Diyarbakır, Turkey
Sažetak
U radu je pročišćena i okarakterizirana α-amilaza, izolirana iz novootkrivenog soja bakterije Anoxybacillus sp. AH1, stabilna pri visokim temperaturama u prisutnosti detergenata. Najveća količina enzima (1874,8 U/mL) proizvedena je nakon 24 sata inkubacije. Nakon pročišćavanja amilaze gel-filtracijskom kromatografijom u koloni punjenoj gelom Sephadex G-75, specifična se aktivnost enzima povećala 18 puta, a prinos je bio 9 %. Metodom SDS-PAGE određena je molekularna masa pročišćenog enzima od 85 kDa. Optimalna je pH-vrijednost bila 7,0; a optimalna temperatura 60 °C. Enzim je bio izuzetno stabilan u prisutnosti 30 %-tnog glicerola, te je zadržao 85 % aktivnosti na 60 °C tijekom 120 min. Pomoću Lineweaver-Burkovog dijagrama utvrđeno je da je vrijednost Km amilaze bila 0,102 μmol, a vmax 0,929 μmol/min. Aktivnost se enzima povećala u prisutnosti različitih detergenata, dok se u prisutnosti uree znatno smanjila. Ioni magnezija i kalcija bitno su povećali, a ioni cinka i bakra, te kelatori metalnih iona EDTA i 1,10-fenantrolin smanjili aktivnost α-amilaze. Aktivnost se α-amilaze znatno povećala i u prisutnosti β-merkaptoetanola i ditiotreitola, no smanjila dodatkom p-kloromerkuribenzojeve kiseline. Jodoacetamid i N-etilmaleimid imali su blag, a fenilmetilsulfonil fluorid jak inhibicijski učinak na aktivnost amilaze.
Ključne riječi
α-amilaza stabilna u prisutnosti detergenata; Anoxybacillus sp. AH1; inhibicija enzima; pročišćavanje enzima
Hrčak ID:
155098
URI
Datum izdavanja:
31.3.2016.
Posjeta: 1.417 *