Veterinarski arhiv, Vol. 82 No. 1, 2012.
Izvorni znanstveni članak
Procjena osjetljivosti lančane reakcije polimerazom za dokaz virusa anemije u pilića uporabom različitih početnica za tri gena.
Anci S. Manoharan
; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, Tamil Nadu Veterinary and Animal Sciences University, Chennai, India
Pachaikani Ramadass
; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, Tamil Nadu Veterinary and Animal Sciences University, Chennai, India
Kathaperumal Kumanan
; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, Tamil Nadu Veterinary and Animal Sciences University, Chennai, India
Sažetak
Matrice gena virusa anemije pilića klonirane u plazmidnoj DNA (pCR4 CAV-VP1 te pCR4-CAV-VP2 i 3) bile su rabljene radi razvijanja osjetljive lančane reakcije polimerazom (PCR) za njihovo dokazivanje. Za procjenu osjetljivosti PCR-a bilo je rabljeno devet kompleta početnica među kojima je bio jedan komplet već objavljenih i dva kompleta sintetiziranih početnica za svaki gen virusa anemije pilića, odnosno za VP1, VP2 i VP3. Uvjeti PCR-a za umnožavanje bili su standardizirani sa sintetiziranim početnicama kako bi se dobio pojedinačni specifični umnožak za svaki gen. Osjetljivost PCR-a bila je procijenjena na osnovi deseterostrukih serijskih razrjeđenja kloniranih plazmidnih matrica u reakciji rabljenih u svakom kompletu početnica za svaki gen virusa. Najveće razrjeđenje plazmidne DNA virusa koje je pokazivalo jasno vidljiv umnožak bilo je uzeto kao krajnja mogućnost dokaza. Rezultati su pokazali da je proizvedena početnica VP1.2 bila osjetljivija za gen VP1, a koncentracija plazmidne DNA iznosila je 0,05 fg/μL ili 8,6 ×103 molekula/mL. Početnica VP2.2 bila je osjetljivija za gen VP2, a koncentracija plazmida bila je 5 ag/μL ili 9,9 ×102 molekula/mL. U slučaju VP3, objavljena početnica VP3.1 pokazala se osjetljivijom za gen VP3, a koncentracija plazmida iznosila je 5 ×10-4 ag/μL ili 10,5 ×10-2 molekula/mL. Nalazi ovog istraživanja mogu biti korisni u dijagnostici, sekvencioniranju, kloniranju i ekspresiji.
Ključne riječi
virus anemije pilića; lančana reakcija polimerazom; početnice; umnožak
Hrčak ID:
77406
URI
Datum izdavanja:
6.2.2012.
Posjeta: 1.500 *