Izvorni znanstveni članak
Istraživanje genotoksičnih učinaka irinotekana na ljudskim limfocitima periferne krvi primjenom različitih biomarkera u uvjetima in vitro
Nevenka Kopjar
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Nina Pleša
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Snježana Ramić
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Vesna Pavlica
; University Hospital for Tumors, Zagreb, Croatia
Marija Gamulin
; University Hospital Zagreb, Zagreb, Croatia
Sažetak
Primjenom različitih biomarkera u uvjetima in vitro istraženi su genotoksični učinci terapijske koncentracije irinotekana (350 mg/m2) na limfocite periferne krvi. Razine primarnih oštećenja DNA u limfocitnoj DNA i dinamika njihovog popravka istraženi su primjenom komet testa u alkalnim i neutralnim uvjetima. Preživljenje limfocita i indukcija apoptoze nakon izlaganja stanica irinotekanu istraženi su istodobnom primjenom fluorescencijskog bojenja etidij-bromidom i akridin oranžom. Razine oštećenja DNA procijenjene su i s pomoću testa izmjena sestrinskih kromatida, a mogući učinci tretmana na progresiju mitotičkog ciklusa istraženi su analizom proliferacijske kinetike limfocita. Utvr|eno je da je postotak apoptoza u svim vremenima uzorkovanja i analize bio veći od postotka nekroza. Pozitivni rezultati dobiveni s obje modifikacije komet testa pokazuju da se u limfocitnoj DNA nakon tretmana irinotekanom inducira mnoštvo jednolančanih i dvolančanih lomova. Dinamika nastanka oštećenja uočena primjenom obje modifikacije komet testa, jasno upućuje na disfunkciju enzima topoizomeraze I, koje se navodi kao glavni mehanizam citotoksičnosti irinotekana. Nakon tretmana irinotekanom uočili smo gotovo sedmerostruki porast učestalosti SCE u izloženim limfocitima u odnosu na kontrolu, što upozorava na poremećenu funkciju topoizomeraze u S-fazi. Na osnovi rezultata zaključujemo da irinotekan uzrokuje zastoj proliferacije stanica u prvom mitotskom ciklusu in vitro. Dobiveni rezultati pokazuju da terapijske koncentracije irinotekana uzrokuju značajan porast oštećenja DNA i kromosoma u ljudskim limfocitima periferne krvi. Budući da su učinci irinotekana u uvjetima in vivo znatno pojačani metaboličkom pretvorbom u aktivni metabolit SN-38, možemo pretpostaviti da su razine oštećenja DNA u aktivno dijelećim stanicama u pacijenata liječenih primjenom irinotekana značajno više nego one utvr|ene u uvjetima in vitro. Rezultati upućuju i na važnost istraživanja biomarkera u ne-tumorskim stanicama pacijenata koji su liječeni primjenom kemoterapije jer takvi biomarkeri mogu biti dobri pretkazatelji u otkrivanju osjetljivih populacija pacijenata s nestabilnim genomom u kojih je prisutan veći rizik za razvoj sekundarnih karcinoma.
Ključne riječi
irinotekan; limfociti; genotoksičnost; oštećenje i popravak DNA
Hrčak ID:
281571
URI
Datum izdavanja:
20.12.2004.
Posjeta: 289 *