Veterinarski arhiv, Vol. 92 No. 4, 2022.
Izvorni znanstveni članak
https://doi.org/10.24099/vet. arhiv.1407
Izolacija iz periferne krvi i analiza funkcija heterofila kokoši protočnom citometrijom – metodološko istraživanje
Erdal Matur
; Istanbul University-Cerrahpaşa, Veterinary Faculty, Department of Physiology, Istanbul, Turkey
Mert Erek
; Istanbul University-Cerrahpaşa, Graduate Education Institute, Istanbul, Turkey
Ezgi Ergen
; Istanbul University-Cerrahpaşa, Veterinary Faculty, Department of Physiology, Istanbul, Turkey
Bilge Acar Bolat
; Istanbul University, Faculty of Business Administration, Department of Quantitative Methods, Istanbul, Turkey
Mukaddes Özcan
; Istanbul University-Cerrahpaşa, Veterinary Faculty, Department of Physiology, Istanbul, Turkey
Sažetak
Cilj je istraživanja bio prilagoditi metodu protočne citometrije, koja se inače primjenjuje u analizi neutrofila, za analizu funkcija ptičjih heterofila. Uzorci krvi 10 kokoši dobiveni su iz klaonica. Uzevši u obzir količinu krvi, kao i trajanje pohrane krvnih uzoraka odnosno vrijeme inkubacije, analizirana su stanična suspenzija, dihidrorodamin-123 (DHR-123), forbol-12-miristat-13-acetat (PMA) i N-formil-metionil-leucil-fenilalanin (fMLP). Rezultati su pokazali da se 0,5 – 3 mL krvi može upotrijebiti za otkrivanje funkcija heterofila te da bi idealno bilo analizirati svježe uzorke krvi. Osim toga rezultati su pokazali da se i krv pohranjena na temperaturi od +4 °C, u vremenu do 8 sati, može upotrijebiti ako je to potrebno. Kako bi se stanice izolirale, dovoljno je centrifugirati 30 minuta uz primjenu stanične suspenzije od 30 μL. Kao kemijsku probu za mjerenje funkcija heterofila trebalo bi upotrijebiti 2 μL DHR-123. Prekomjerna upotreba DHR-123 negativno je utjecala na funkcije heterofila. Također, uočeno je da je bila dovoljna primjena 2 μL fMLP-a, koji služi kao stimulans oksidacijskog izgaranja, kao i primjena 2 μL PMA-a kao stimulansa kemotaktičke aktivnosti. Zaključeno je da je inkubacija na temperaturi od 41 °C, tijekom 5 minuta poslije stimulacije heterofila također dovoljna. Rezultati su pokazali da se metode ustanovljene u ovom radu mogu primijeniti za izolaciju heterofila i njihovu analizu protočnom citometrijom, čime se doprinosi daljnjim istraživanjima i kliničkim studijama u peradi.
Ključne riječi
ptice; fagocitna aktivnost; oksidacijsko izgaranje; kemotaktička aktivnost
Hrčak ID:
283896
URI
Datum izdavanja:
26.9.2022.
Posjeta: 923 *