Skoči na glavni sadržaj

Izvorni znanstveni članak

https://doi.org/10.18047/poljo.30.1.5

Čuvanje izolirane biljne DNK: je li –20 °C dovoljno hladno?

Renata Hanzer orcid id orcid.org/0009-0009-8870-1584 ; Hrvatska agencija za poljoprivredu i hranu, Vinkovačka cesta 63c, 31000 Osijek, Hrvatska
Ksenija Duka ; Hrvatska agencija za poljoprivredu i hranu, Vinkovačka cesta 63c, 31000 Osijek, Hrvatska


Puni tekst: engleski pdf 557 Kb

str. 36-43

preuzimanja: 184

citiraj


Sažetak

Visokokvalitetna DNK od presudne je važnosti za enzimske postupke u biljnoj molekularnoj biologiji, kao i za istraživanja u poljoprivredi. Istraživačima je često potrebno pohranjivanje izolirane DNK, koja i nakon mjeseci i godina mora biti prikladna za nizvodne enzimske metode, kao što je PCR u stvarnome vremenu. Pohranjivanje DNK kao precipitata u etanolu na –80 °C često je korištena metoda konzerviranja. Cilj je ovih istraživanja bilo utvrđivanje je li isto primjenjivo na –20 °C. U ovoj studiji visokokvalitetna DNK iz sjemena soje i kukuruza izolirana je široko korištenom CTAB metodom. Uzorci DNK pohranjeni su u trima režimima: otopljena DNK u vodi na +4 °C, otopljena DNK u vodi na –20 °C i neotopljena DNK u etanolu na –20 °C. Koncentracija i prinos mjereni su s pomoću spektrofotometra. Nečistoće i fragmentiranje procijenjeni su vizualizacijom na agaroznome gelu elektroforezom. Dodatno je DNK procijenjena amplifikacijom s pomoću PCR–a u stvarnome vremenu. Količina i kvaliteta izolirane DNK procijenjena je prije i nakon jednogodišnjega skladištenja. Rezultati pokazuju da etanol pruža izvrsnu zaštitu za kratkotrajno skladištenje DNK na –20 °C i vjerojatno za dugotrajno skladištenje zbog smanjenoga sadržaja vode i blago bazičnih uvjeta. Takav režim skladištenja mogao bi biti dobro rješenje kada druge opcije nisu dostupne.

Ključne riječi

DNK; sjeme; izolacija; etanol; skladištenje; PCR u stvarnome vremenu

Hrčak ID:

318025

URI

https://hrcak.srce.hr/318025

Datum izdavanja:

20.6.2024.

Podaci na drugim jezicima: engleski

Posjeta: 527 *