Izvorni znanstveni članak
https://doi.org/10.2478/10004-1254-60-2009-1895
Optimalne metode otkrivanja antigena za prijenosnike organskih aniona u kriostatskim narescima štakorskog bubrega
Hrvoje Brzica
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Davorka Breljak
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Marija Ljubojević
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Daniela Balen
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Vedran Micek
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Naohiko Anzai
; Pharmacology and Toxicology, Kyorin University School of Medicine, Tokyo, Japan
Ivan Sabolić
orcid.org/0000-0002-2587-9109
; Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Croatia
Sažetak
Za imunocitokemijsku (IC) lokalizaciju antigena uzorci tkiva ili stanica obično se denaturiraju fi ksacijom, a potom se odmah smrznu i naresci režu kriostatom ili se uklope u parafi n prije rezanja narezaka. Parafi n se kasnije odstrani alkoholima. p-Formaldehid (PFA; formalin) čest je fi ksativ, koji čuva antigeničnost proteina, ali oštećuje morfologiju stanica i “maskira” vezna mjesta za protutijela (epitope). Za “demaskiranje” epitopa potrebno je primijeniti neku od metoda otkrivanja (regeneracije) antigena (RA). Namjera ove studije jest: a) odrediti optimalnu metodu RA u kriostatskim narescima PFA-fi ksiranih bubrega in vivo za prijenosnike organskih aniona (Oat) smještene u bazolateralnoj (Oat1, Oat3) i četkastoj (Oat2, Oat5) membrani proksimalnih kanalića u bubrezima štakora i b) rabeći optimalnu metodu, usporediti IC bojenje Oat-a u bubrezima koji su bili PFA-fi ksirani in vivo ili in vitro. IC bojenje u neobrađenim kriostatskim narescima uspoređeno je s bojenjem nakon obrade detergentom ili mikrovalnim kuhanjem u citratnom puferu pH 3, pH 6 ili pH 8, s prethodnom obradom alkoholima ili bez nje. Optimalni RA-uvjet za Oat1, Oat2 i Oat5 bio je kuhanje narezaka pri pH 6, a za Oat3 pri pH 3, bez prethodne obrade alkoholima. U usporedbi s tkivom fi ksiranim in vivo, tkivo fi ksirano in vitro imalo je: oštećenu morfologiju kanalića, sličnu jačinu bojenja Oat1 i Oat3, a jače bojenje Oat2 i Oat5. Zaključujemo da svaki Oat u bubregu štakora treba obraditi pojedinačno, s različitom fi ksacijom i metodom RA, kako bi se našli optimalni uvjeti za njegovo IC prikazivanje.
Ključne riječi
imunocitokemija; imunofluorescencija; kriostatski naresci; membranski prijenosnici; proksimalni kanalići; stanična membrana
Hrčak ID:
34842
URI
Datum izdavanja:
27.3.2009.
Posjeta: 3.239 *