Skoči na glavni sadržaj

Arhiv za higijenu rada i toksikologiju, Vol. 60 No. 2, 2009.

Izvorni znanstveni članak

https://doi.org/10.2478/10004-1254-60-2009-1915

Karboksilesteraza djelomice hidrolizira estere gama-butirobetaina u serumu štakora

Lida Bagdoniené ; Department of Biochemistry and Biophysics, Vilnius University, Vilnius, Lithuania
Danutė Labeikytė ; Department of Biochemistry and Biophysics, Vilnius University, Vilnius, Lithuania
Ivars Kalviņš ; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia
Veronika Borutinskaitė ; Department of Developmental Biology, Institute of Biochemistry, Vilnius, Lithuania
Aleksandrs Prokofjevs ; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia
Pēteris Trapencieris ; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia
Benediktas Juodka ; Department of Biochemistry and Biophysics, Vilnius University, Vilnius, Lithuania
Nikolajs Sjakste ; Latvian Institute of Organic Synthesis, Riga, Latvia

Puni tekst: engleski pdf 168 Kb

str. 147-156

preuzimanja: 1.110

citiraj

Sažetak

Premda su poznati već neko vrijeme, esteri gama-butirobetaina (GBB) i srodni spojevi nisu dobili mnogo pozornosti u znanstvenoistraživačkoj zajednici, a njihova fiziološka funkcija i dalje je nerazjašnjena. U ranijem smo istraživanju HPLC-metodom otkrili enzimsku aktivnost GBB-esteraze u serumu štakora rabeći umjetni supstrat ovoga enzima, tj. fenilirani gama-butirobetain. Cilj ovoga istraživanja bio je razviti pretragu koja će omogućiti spektrofotometrijsko ili kolorimetrijsko određivanje reakcijskih produkata nastalih aktivnošću GBB-esteraze te utvrditi koji pojedinačni proteini u serumu štakora posjeduju aktivnost GBB-esteraze. U tu je svrhu sintetiziran gama-butirobetain 1-naftil ester. Njegovom hidrolizom otpušta se 1-naftol koji povećava optičku apsorbanciju na 322 nm. Pokazali smo da u hidrolizi GBB 1-naftil estera u 1-naftol u serumu štakora sudjeluje GBB-esteraza. Pokušali smo pročistiti enzim iz štakorskoga seruma. Kombinacijom DEAE sefaroze pri pH 4,2 i afinitetne kromatografije s prokainamidom dobili smo 68-erostruko povećanje aktivnosti ovoga enzima. Razdvajanjem bjelančevina iz frakcije s pomoću 2D elektroforeze te naknadnom spektrometrijom masa utvrđeno je da u serumu štakora esteraznu aktivnost prema gama-butirobetainu kao supstratu djelomice provodi karboksilesteraza.

Ključne riječi

2D elektroforeza; HPLC; kolorimetrija; 1-naftol; spektrofotometrija

Hrčak ID:

38386

URI

https://hrcak.srce.hr/38386

Datum izdavanja:

12.6.2009.

Podaci na drugim jezicima: engleski

Posjeta: 2.419 *