Paediatria Croatica, Vol. 53 No. 3, 2009.
Pismo uredniku
Kako ispravno opisivati metodu za određivanje koncentracije IgE-a?
Slavica Dodig
; Dječja bolnica Srebrnjak
Sažetak
Sa zanimanjem sam pročitala rad „Kožni ubodni test u dojenčadi – koliko je koristan u dijagnosticiranju atopije?“ (1). Jedan od ciljeva rada, kako je autorica naglasila, bio je ispitati povezanost kožnog testa s koncentracijom odgovarajućih specifičnih antitijela IgE-a, i baš se na taj dio rada želim osvrnuti. U odlomku „Ispitanici i metode“ opisuju se primijenjene metode i citiraju literaturni navodi. Na žalost, odlomak koji se odnosi na određivanje koncentracije specifičnih antitijela IgE-a je u stručnom smislu netočan i neprecizan, a literatura dijelom neodgovarajuća i zastarjela. Čini se da je zabuna u spomenutom odlomku nastala prepisivanjem podataka iz neodgovarajućih literaturnih izvora, a na žalost i bez konzultacije s medicinskim biokemičarom. Metode RAST (Radio-Allergo Sorbent Test) za određivanje koncentracije specifičnih IgE-a, kod koje se imunokemijska reakcija odvija na dvodimenzionalnom papirnatom nosaču, a biljeg završne imunokemijske reakcije je radioaktivni izotop, uvedene su 1974. godine (2). Rezultati su se izražavali u arbitrarnim jedinicama i alternativno u razredima 0 do 4. Već se 1981. godine za obilježavanje reakcije umjesto radioaktivnog izotopa počinju primjenjivati enzimski biljezi, a metode s radioizotopima postupno odlaze u povijest. Od godine 1989. se umjesto dvodimenzionalnog nosača primjenjuje trodimenzionalni fleksibilni hidrofilni polimerni nosač uklopljen u kapsulu (metoda Immuno CAP), te monoklonalna anti-IgE-antitijela, a u završnoj reakciji mjeri se intenzitet fluorescencije (3, 4). Budući da je metoda standardizirana, rezultati se izražavaju kvantitativno u rasponu od 0,36 do 100 kUA/L, ali i u razredima 0 do 6 (tablica 1). Tablica 1. Tumačenje vrijednosti specifičnih IgE-a (sIgE) u serumu (prema 3) Specifični IgE (kUA/L) Razred Tumačenje rezultata < 0,35 0 nemjerljiva koncentracija sIgE 0,36 - 0,7 1 najmanja koncentracija sIgE 0,71 - 3,5 2 mala koncentracija sIgE 3,6 - 17,5 3 umjerena koncentracija sIgE 17,6 - 50,0 4 velika koncentracija sIgE 51,0 - 100,0 5 vrlo velika koncentracija sIgE-a > 100,0 6 izrazito velika koncentracija sIgE-a Ubrzo je metoda prihvaćena kao zlatni standard za in vitro otkrivanje preosjetljivosti posredovane imunoglobulinom E. Danas je metoda CAP sastavni dio smjernica PRACTALL (5) te ima odobrenje Agencije za hranu i lijekove. Primjenjuje se u oko 80% kliničkih laboratorija u svijetu, a i u većine laboratorija u Hrvatskoj koji su u sustavu HZZO-a, pa se može smatrati da je metoda u Hrvatskoj harmonizirana (iako se u nekim laboratorijima primjenjuju manje specifične i manje osjetljive metode). Prema tome, koncentracija IgE-a (kako ukupnog, tako i specifičnog), određuje se fluoro-enzim-imunokemijskom metodom (FEIA, Fluoro Enzyme Immuno Assay) (6). Alergen je kovalentno vezan na ukapsulirani (CAP) fleksibilni hidrofilni polimerni nosač, nosač velikoga kapaciteta vezanja. Vezani alergen iz reagensa specifično reagira s ukupnim/specifičnim IgE-om iz ispitivanog seruma. Nakon ispiranja nespecifičnog IgE-a dodaje se monoklonalno mišje anti-IgE antitijelo obilježeno beta-galaktozidazom, a nakon dodavanja supstrata 4-metil-umbeliferil-beta-galaktozida mjeri se nastala fluoroscencija, koja je razmjerna koncentraciji ukupnog/specifičnog IgE-a u uzorku. Metoda je standardizirana prema Sekundarnom referentnom pripravku Svjetske zdravstvene oraganizacije (2nd WHO International Reference Preparation of Human Serum Immunoglobulin E, IRP 75/502). Aktivnost standarda definirana je kao 5000 IU (5 kIU) u ampuli (0,5 mL)(1 kU/L = 2,4 mg/L, odnosno 1U/L = 2,4 ng/L) (7). Standardizacija metode omogućila je dobivanje točnih, preciznih, odnosno reproducibilnih rezultata, koji su joj povećali dijagnostičku osjetljivost i specifičnost (8, 9). Koeficijent varijacije unutar određivanja je oko 5%, a između određivanja oko 10%. Ujedno postoji i međunarodni sustav kontrole kvalitete određivanja koncentracije ukupnog i specifičnog IgE-a ("Quality CAP-Interlab Quality Control"). Ovo pismo uredniku napisano je iz želje da se metoda ubuduće ispravno opisuje, te tako poboljša kvaliteta radova koji se objavljuju u časopisu Paediatria Croatica.
Ključne riječi
Hrčak ID:
43634
URI
Datum izdavanja:
20.11.2009.
Posjeta: 1.947 *