Izvorni znanstveni članak
https://doi.org/10.2478/10004-1254-61-2010-200
Određivanj prisutnosti ekotoksikološki važnih Pgp i MRP-proteina u šarankama na genskoj i proteinskoj razini
Roberta Sauerborn Klobučar
; Division for Marine and Environmental Research, Ruđer Bošković Institute, Zagreb, Croatia
Roko Žaja
; Division for Marine and Environmental Research, Ruđer Bošković Institute, Zagreb, Croatia
Damjan Franjević
; Division of Biology, Faculty of Science, University of Zagreb, Zagreb, Croatia
Anamarija Brozović
; Division for Molecular Biology, Ruđer Bošković Institute, Zagreb, Croatia
Tvrtko Smital
; Division for Marine and Environmental Research, Ruđer Bošković Institute, Zagreb, Croatia
Sažetak
Mehanizam multiksenobiotičke otpornosti (MXR) stanični je obrambeni sustav odgovoran za svojstvo istovremene otpornosti na različite ksenobiotike, koje se očituje smanjenjem akumulacije, odnosno povećanjem izbacivanja potencijalno toksičnih tvari iz stanica vodenih organizama. MXR-mehanizam pokazuje odlike analogne fenomenu istovremene otpornosti na različite lijekove (engl. multidrug resistance, MDR) prvi put dokazanom u tumorskim stanicama. Posredovan je istim ABC transportnim proteinima kao
i MDR. Istraživanja vezana uz MXR vodenih životinja uglavnom su imala težište na određivanju prisutnosti i funkcije P-glikoproteina (Pgp). Budući da se ribe iz reda šaranki često rabe u biomonitoringu slatkovodnih voda, cilj ovog istraživanja bilo je određivanje prisutnosti dvaju glavnih MDR/MXR-tipova proteina - Pgp i MRP-tip proteina - u jetri iz pet vrsta šaranki; šarana (Cyprinus carpio), klena (Sqalius cephalus), mrene (Barbus barbus), babuške (Carassius auratus gibelio) i podusta (Chondrostoma nasus). Njihova prisutnost utvrđena je na razini mRNA te na proteinskoj razini. Različiti parovi početnica dizajnirani su kako bi se identifi cirali homologni fragmenti gena sličnih MXR-u. Detekcija na razini proteina napravljena
je putem Western blot analize s pomoću specifi čnih monoklonskih protutijela proizvedenih da prepoznaju konzervirane epitope; Pgp (C219), MRP1 (MRPm6) ili MRP2 (M2I-4) u sisavaca. Transkripti obaju ključnih MXR-transportera identifi cirani su u svim jedinkama, a napravljena je i fi logenetska analiza dobivenih sekvenci. Imunokemijskom detekcijom s protutijelima sisavaca nismo uspjeli detektirati prisutnost MRP-proteina, dok je Pgp-ekspresija potvrđena u svih pet vrsta šaranki. Nove spoznaje da je za MXRmehanizam
zaslužno više transportnih proteina zasigurno će pridonijeti potpunijoj karakterizaciji MXR-a kao integralnog dijela detoksikacijskog, odnosno temeljnog obrambenog sustava vodenih organizama te
njegovoj znanstvenoj afi rmaciji kao vjerodostojnog pokazatelja kvalitete okoliša.
Ključne riječi
ABC-proteini; filogenetička analiza; mehanizam multiksenobiotičke otpornosti (MXR); vodeni organizmi; Western blot analiza
Hrčak ID:
53961
URI
Datum izdavanja:
16.6.2010.
Posjeta: 1.882 *