Original scientific paper
https://doi.org/10.2478/10004-1254-63-2012-2236
Profil osjetljivosti na kaspofungin i flukonazol i ekspresija gena Als1 i Als3 u stanicama biofilma te planktonskim stanicama vrste Candida albicans
Helena Bujdáková
; Comenius University, Faculty of Natural Sciences, Department of Microbiology and Virology, Bratislava, Slovakia
Naďa Kulková
; Comenius University, Faculty of Natural Sciences, Department of Microbiology and Virology, Bratislava, Slovakia
Lucia Černáková
; Comenius University, Faculty of Natural Sciences, Department of Microbiology and Virology, Bratislava, Slovakia
Abstract
Rasprostranjenju biofilma pridonose oslobođene, tzv. planktonske stanice, koje nastaju u posljednjoj fazi oblikovanja biofilma. U ovome istraživanju usporedili smo osjetljivost stanica biofilma i planktonskih stanica (prekonoćna bujonska kultura) C. albicans na kaspofungin (CAS) i fl ukonazol (FLU) u uvjetima kada su lijekovi dodavani: i) na početku pokusa; ii) nakon 1,5 h (faza priljepljivanja, adherencije); iii) nakon 24 h (rana zrelost biofilma). Nakon 48 h u fazi zrelog biofi lma provedeno je mjerenje primjenom testa redukcije XTT-a. Dobiveni rezultati potvrđuju da kasnija primjena lijeka povisuje sesilnu minimalnu inhibicijsku koncentraciju, SMIC80 (od engl. sessile minimal inhibitory concentration) i FLU i CAS (u rasponu od 1 μg mL-1 do ≥64 μg mL-1 te u rasponu od 0,125 μg mL-1 do ≥16 μg mL-1). Nadalje, uočili smo smanjenu osjetljivost planktonskih stanica na lijekove. U drugom dijelu pokusa usredotočili smo se na ekspresiju Als1 i Als3 gena u C. albicans SC5314, kako u sesilnim stanicama iz biofi lma starog 48 h tako i u stanicama koje su se izdvojile iz njega te smo ih usporedili s kulturom planktonskih stanica. Ekspresiju smo u svakome od ispitanih uvjeta testiranja normalizirali prema genu Act1 kao standardu. Primjenom kvantitativnog PCR-a u realnom vremenu (engl. Quantitative Real Time PCR) dokazali smo snažno pojačanu ekspresiju gena Als1 u zrelim stanicama koje se oslobađaju iz biofilma, ali ne i u sesilnom biofilmu, kao i visoku ekspresiju gena Als3 i u biofilmu i u stanicama koje su se izdvojile iz njega. Takvi rezultati upućuju na to da se osjetljivost stanica udruženih u biofilm te stanica oslobođenih iz njega na FLC i CAS smanjuje s kasnijim vremenom primjene lijeka, a, dodatno, visoka ekspresija gena Als1 i Als3 govori u prilog hipotezi da su stanice oslobođene iz biofi lma visoki čimbenik rizika i izvor infekcije.
Keywords
Act1; infekcije putem krvi; MIC; PCR; test redukcije XTT-a
Hrčak ID:
93657
URI
Publication date:
14.12.2012.
Visits: 1.800 *