Acta clinica Croatica, Vol. 44 No. 2, 2005.
Conference paper
Regulacija rasta i diferencijacije embrija sisavaca faktorima rasta FGF i NGF u kulturi organa in vitro
Vesna Crnek-Kunstelj
Jagoda Stipić
Tomislav Zeljko
Abstract
Namjera je bila istražiti regulaciju rasta i diferencijacije pomoću fibroblastnog faktora rasta (FGF) i faktora rasta živaca (NGF) u jedinstvenom in vitro modelu za kultiviranje embrija sisavaca u kritičnoj fazi razvoja, gastrulaciji, tijekom dva tjedna. Oba faktora imaju ključnu ulogu u embriogenezi sisavaca, a svrha je bila istražiti njihov mogući sinergistični učinak kada su embriji sisavaca najosjetljiviji na djelovanje pojedinih vanjskih čimbenika. Embrije štakora stare 9,5 dana kultivirali smo na metalnoj mrežici s lećnim papirićem, na granici plinske i tekuće faze, u temeljnom mediju za kultiviranje (Eagleovom minimalnom esencijalnom mediju (MEM) s 50% homolognog seruma) uz dodatak faktora rasta FGF, NGF i kombinacije FGF/NGF tijekom 9 dana kulture. Druge tri skupine embrija su prethodno bile tretirane 24 sata 5-azacitidinom (5azaC), agensom koji može aktivirati gene. Paralelne skupine embrija kultivirane su u temeljnom mediju kao kontrolne. Tijekom 14 dana kultiviranja embriji izrastu u teratoidne strukture, a pritom se rast procjenjuje određivanjem prosječene veličine eksplantata pomoću okularnog mikrometra u određene dane (5, 7, 11, 14) nakon dodavanja faktora rasta. Razlike u rastu između pojedinih skupina ispitane su Studentovim t-testom. Prisutnost diferenciranih tkiva u teratomima utvrđena je analizom na serijskim histološkim rezovima. Razlike u proporcijama diferenciranih tkiva između pojedinih skupina utvrđene su c2-testom ili Fisherovim egzaktnim testom. U embrijskim teratomima razvijenim in vitro niti NGF niti FGF/NGF kombinirani tretman nisu stimulirali diferencijaciju bilo koje vrste tkiva, dapače, FGF/NGF kombinacija je inhibirala sazrijevanje epidermisa. FGF je stimulirao diferencijaciju živčanog tkiva (p<0,05), miotuba i hemopoezu. Nismo mogli utvrditi sinergistični učinak FGF i NGF u procesu diferencijacije bilo koje vrste tkiva. Dapače, čini se da NGF smanjuje stimulacijski učinak FGF u procesu diferencijacije. NGF suzbija rast eksplantata, ali u kombinaciji s FGF djeluje sinergistično, značajno povećavajući rast eksplantata. NGF nije imao učinka na očekivano povećanje diferencijacije živčanog tkiva, nakon dodatne aktivacije gena pomoću 5azaC, međutim, diferencijacija miotuba je značajno povećana. Kombinirano djelovanje 5azaC/FGF i 5azaC/FGF/NGF na aktivnost gena povećalo je učestalost diferencijacije živčanog tkiva, miotuba i hemopoezu u eksplantatima. Ovaj rezultat potvrđuje djelovanje FGF kao induktora živčanog tkiva i mezoderma. U svakom slučaju diferencijacija potaknuta FGF i NGF signalima djelomice ovisi o stupnju metilacije gena.
Keywords
Kultura embrija sisavaca; Fibroblastni faktor rasta; Faktor rasta živaca, Embrijski teratom
Hrčak ID:
15396
URI
Publication date:
1.6.2005.
Visits: 1.425 *