Original scientific paper

https://doi.org/10.46419/vs.52.6.4

Komparativna studija dviju različitih metoda određivanja integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta: bojanje s FITC-PNA/EthD-1 u usporedbi s bojanjem Coomassie plavom

Janyaporn Rungruangsak ; Department of Obstetrics, Gynaecology and Reproduction, Faculty of Veterinary Science, Chulalongkorn University, Bangkok 10330, Thailand
Junpen Suwimonteerabutr ; Swine Reproduction Research Unit, Department of Obstetrics, Gynaecology and Reproduction, Faculty of Veterinary Science, Chulalongkorn University, Bangkok 10330, Thailand
Kakanang Buranaamnuay ; Institute of Molecular Biosciences, Mahidol University 25/25 Phuttamonthon 4 Rd., Salaya, Nakhon Pathom 73170, Thailand
Arun Chankrachang ; Embryo Transfer Technology and Germplasm Research Center, Pakchong, Nakhonratchasima 30130, Thailand
Padet Tummaruk orcid.org/0000-0001-7000-4371 ; Swine Reproduction Research Unit, Department of Obstetrics, Gynaecology and Reproduction, Faculty of Veterinary Science, Chulalongkorn University, Bangkok 10330, Thailand

Abstract

Postoje izvješća da je bojanje Coomassie plavom učinkovita i jeftina metoda procjene integriteta akrosome spermija. Međutim, ne postoje izvješća o bojanju Coomassie plavom za procjenu integriteta akrosome krioprezervirane sperme nerasta. Nadalje, informacije u svezi podudarnosti između bojanja Coomassie plavom i fluorescein izotiocijanatom konjugiranim s aglutininom kikirikija i etidij homodimerom (FITC-PNA/ EthD-1) za procjenu integriteta akrosome spermija nisu dostupne niti za jednu vrstu. Stoga je ova studija provedena za određivanje učinkovitosti i podudarnosti između metoda bojanja Coomassie plavom i bojanja FITC-PNA/EthD-1 za procjenu integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta. U eksperiment je uključeno ukupno 25 uzoraka sjemena. Sjeme je krioprezervirano uporabom razrjeđivača na bazi laktoze i žumanjka i pohranjeno u 0,5 PVC-pajete. Svojstva pokretljivosti i gibanja spermija ustvrđena su uporabom sustava za računalno potpomognutu analizu spermija. Vijabilnost spermija i integritet njihove stanične membrane procijenjeni su uporabom SYBR-14/EthD-1, odnosno hipoosmotskim testom bubrenja. Integritet akrosome smrtznute pa odmrznute sperme nerasta procijenjen je uporabom bojanja FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom. Procijenjena je povezanost između integriteta akrosome sperme ustvrđene pomoću bojanja FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom te podudarnost između dviju metoda mjerenja. Prosječni postotak integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta ustvrđene bojanjem FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom bio je 48,8 ± 12,6 %, odnosno 52,6 ± 13,6% (P>0,05). Zanimljivo, vijabilnost spermija korelirala je s integritetom akrosome procijenjenom uporabom Coomassie plavom (r=0,609, P=0,002), ali nije korelirala kada je procjenjivana uporabom FITC-PNA/EthD-1 bojanja (P>0,05). Međutim, integritet akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta procijenjen bojanjem FITC-PNA/EthD-1 i Coomassie plavom značajno je korelirao (r=0,448, P=0,025, n=25). Uz to, podudarnost između bojanja Coomassie plavom i FITC-PNA za procjenu integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta ustvrđena Bland- Altmanovim grafikonom bila je prihvatljiva. Zaključno, integritet akrosome smrznute pa odmrznute sperme nerasta procijenjena bojanjem Coomassie plavom značajno je korelirao s onim dobivenim FITC-PNA/EthD- 1 metodom bojanja te su te dvije metode pokazale dobru podudarnost. Uz to, značajna povezanost između integriteta akrosoma smrznute pa odmrznute sperme nerasta koja je ustvrđena bojanjem Coomassie plavom i drugih parametara kakvoće sperme ukazuju na to da je bojanje Coomassie plavom učinkovita metoda procjene integriteta akrosome smrznute pa odmrznute sperme u svinja.

Keywords

integritet akrosome; nerast; Coomassie plava; krioprezervacija; FITC-PNA

Hrčak ID:

249022

URI

https://hrcak.srce.hr/249022

Publication date:

2.5.2021.

Article data in other languages: english

Visits: 1.922 *