Agriculture, Vol. 30 No. 1, 2024.
Original scientific paper
https://doi.org/10.18047/poljo.30.1.5
Čuvanje izolirane biljne DNK: je li –20 °C dovoljno hladno?
Renata Hanzer
orcid.org/0009-0009-8870-1584
; Croatian Agency for Agriculture and Food, Vinkovačka cesta 63c, 31000 Osijek, Croatia
Ksenija Duka
; Croatian Agency for Agriculture and Food, Vinkovačka cesta 63c, 31000 Osijek, Croatia
Abstract
Visokokvalitetna DNK od presudne je važnosti za enzimske postupke u biljnoj molekularnoj biologiji, kao i za istraživanja u poljoprivredi. Istraživačima je često potrebno pohranjivanje izolirane DNK, koja i nakon mjeseci i godina mora biti prikladna za nizvodne enzimske metode, kao što je PCR u stvarnome vremenu. Pohranjivanje DNK kao precipitata u etanolu na –80 °C često je korištena metoda konzerviranja. Cilj je ovih istraživanja bilo utvrđivanje je li isto primjenjivo na –20 °C. U ovoj studiji visokokvalitetna DNK iz sjemena soje i kukuruza izolirana je široko korištenom CTAB metodom. Uzorci DNK pohranjeni su u trima režimima: otopljena DNK u vodi na +4 °C, otopljena DNK u vodi na –20 °C i neotopljena DNK u etanolu na –20 °C. Koncentracija i prinos mjereni su s pomoću spektrofotometra. Nečistoće i fragmentiranje procijenjeni su vizualizacijom na agaroznome gelu elektroforezom. Dodatno je DNK procijenjena amplifikacijom s pomoću PCR–a u stvarnome vremenu. Količina i kvaliteta izolirane DNK procijenjena je prije i nakon jednogodišnjega skladištenja. Rezultati pokazuju da etanol pruža izvrsnu zaštitu za kratkotrajno skladištenje DNK na –20 °C i vjerojatno za dugotrajno skladištenje zbog smanjenoga sadržaja vode i blago bazičnih uvjeta. Takav režim skladištenja mogao bi biti dobro rješenje kada druge opcije nisu dostupne.
Keywords
DNK; sjeme; izolacija; etanol; skladištenje; PCR u stvarnome vremenu
Hrčak ID:
318025
URI
Publication date:
20.6.2024.
Visits: 96 *