Professional paper

Utjecaj PCR inhibitora na molekularnu dijagnostiku pneumokokne pneumonije

Ivana Mareković ; Clinics of pulmonary diseases Jordanovac, Zagreb, Croatia
Vanda Plečko ; Clinical department of clinical and molecular microbiology, Clinical centre Zagreb, Zagreb, Croatia
Zagorka Boras ; Clinics of pulmonary diseases Jordanovac, Zagreb, Croatia
Ladislav Pavlović ; Clinics of pulmonary diseases Jordanovac, Zagreb, Croatia
Ana Budimir ; Clinical department of clinical and molecular microbiology, Clinical centre Zagreb, Zagreb, Croatia
Zrinka Bošnjak ; Clinical department of clinical and molecular microbiology, Clinical centre Zagreb, Zagreb, Croatia
Blanka Kamauf-Balabanić ; Clinics of pulmonary diseases Jordanovac, Zagreb, Croatia
Sonja Marinković ; Clinics of pulmonary diseases Jordanovac, Zagreb, Croatia
Lidija Žele-Starčević ; Clinical department of clinical and molecular microbiology, Clinical centre Zagreb, Zagreb, Croatia
Smilja Kalenić ; Clinical department of clinical and molecular microbiology, Clinical centre Zagreb, Zagreb, Croatia

Abstract

Cilj: Utvrditi utjecaj inhibitora prisutnih u uzorcima krvi i njenih frakcija te u uzorcima iz respiratornog sustava na rezultate PCR-a za Streptococcus pneumoniae u bolesnika s izvanbolničkom pneumonijom.
Ispitanici i metode: U istraživanje je bilo uključeno 80 ispitanika s izvanbolničkom pneumonijom u kojih je, osim konvencionalnih mikrobioloških pretraga, napravljena i lančana reakcija polimeraze (engl. polymerase chain reaction, PCR) za fragment gena pneumolizina na uzorcima seruma (N=77) i bronhoalveolarnih ispiraka (BAL) (N=19). U uzorcima je utvrđivana prisutnost PCR inhibitora, a za njihovo uklanjanje korišteno je razrjeđivanje uzoraka.
Rezultati: Primijenjenim mikrobiološkim metodama S. pneumoniae dokazan je kod ukupno 25 (31,3 %) ispitanika s izvanbolničkom pneumonijom. PCR rezultati u svih 77 uzoraka seruma bili su negativni, a prisutnost PCR inhibitora utvrđena je u jednom uzorku seruma. PCR je u uzorcima BAL-a bio pozitivan kod tri ispitanika, a inhibitori nisu utvrđeni niti u jednom uzorku BAL-a.
Rasprava: Pri planiranju i izvođenju PCR-a na kliničkim uzorcima treba misliti na moguću prisutnost PCR inhibitora koji mogu biti uzrok lažno-negativnih rezultata. Određenim postupcima PCR inhibitori mogu se ukloniti iz kliničkih uzoraka ili se njihovo djelovanje može umanjiti (metoda izolacije DNA, optimizacija uvjeta umnažanja, razrjeđivanje uzoraka). Prisutnost inhibitora u uzorku može se utvrditi dodavanjem interne kontrole u svaki uzorak ili pomoću spikinga.
Zaključak: S obzirom na to da je u ovom istraživanju prisutnost inhibitora utvrđena samo u jednom uzorku seruma, može se zaključiti da PCR inhibitori u uzorcima seruma i BAL-a ne utječu na rezultate PCR-a za S. pneumoniae u bolesnika s izvanbolničkom pneumonijom.

Keywords

bronhoalveolarni ispirak (BAL); inhibicija; izvanbolnička pneumonija; krv; PCR

Hrčak ID:

31401

URI

https://hrcak.srce.hr/31401

Publication date:

1.12.2008.

Article data in other languages: english

Visits: 2.728 *