Original scientific paper

Brzi lateks aglutinacijski test za serološki dokaz serotipa 4 ptičjeg adenovirusa upotrebom rekombinantnog antigena

Govindan Kalaiselvi ; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, India
Manoharan Parthiban ; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, India
Madaboosi S. Narayanan ; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, India
Srinivasan S. Kumar ; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, India
Kathaperumal Kumanan ; Department of Animal Biotechnology, Madras Veterinary College, India

Abstract

Sindrom hidroperikarda i hepatitisa nova je bolest peradi uzrokovana serotipom 4 ptičjeg adenovirusa. Virus je bio umnožen u primarnoj staničnoj kulturi podrijetlom od jetrenoga tkiva pilećega zametka. Citopatski učinak javio se nakon treće pasaže. DNK je bila izdvojena iz zaražene kulture i rabljena kao kalup za umnožavanje dijela gena heksona (700 bp) uz upotrebu specifičnih početnica. Umnoženi odsječak bio je kloniran u vektoru pProEX HT b, a proizašli proizvod prebačen u DH5α stanice. Rekombinantni klonovi bili su analizirani lančanom reakcijom polimerazom i izdvajanjem plazmida nakon čega je pomoću restrikcijske digestije provjerena uspješnost postupka. Pozitivni klonovi bili su inducirani pomoću IPTG-a. Frakcije induciranih stanica bile su provjeravane svakog sata, a indukcija je bila velika nakon četiri sata. Proizvedene bjelančevine bile su pročišćene i identificirane uporabom hiperimunoga seruma za FAV4 Western blot analizom te se pokazalo da je proizvedena bjelančevina veličine 50 kda. Pročišćena rekombinantna bjelančevina FAV4 bila je rabljena kao antigen u imunoenzimnom testu i lateks aglutinacijskom testu.

Keywords

ptičji adenovirus; gen hexona; kloniranje; E. coli; imunoenzimni test; lateks aglutinacijski test

Hrčak ID:

62390

URI

https://hrcak.srce.hr/62390

Publication date:

16.12.2010.

Article data in other languages: english

Visits: 1.286 *