Izvorni znanstveni članak

https://doi.org/10.17113/ftb.53.03.15.3802

Sustav za izlaganje na površini i sekreciju rekombinantnih proteina u bakteriji Escherichia coli, posredovan ekspresijom autotransportera

Shanna Sichwart ; Institute of Pharmaceutical and Medicinal Chemistry, PharmaCampus,Westphalian Wilhelms - University, Münster, Germany
Iasson E.P. Tozakidis ; Institute of Pharmaceutical and Medicinal Chemistry, PharmaCampus,Westphalian Wilhelms - University, Münster, Germany
Mark Teese ; Institute of Pharmaceutical and Medicinal Chemistry, PharmaCampus,Westphalian Wilhelms - University, Münster, Germany
Joachim Jose ; Institute of Pharmaceutical and Medicinal Chemistry, PharmaCampus,Westphalian Wilhelms - University, Münster, Germany

Sažetak

U radu je opisan novi, optimirani sustav za izlaganje na površini stanice i sekreciju rekombinantnih proteina, nazvan MATE (engl. maximized autotransporter-mediated expression). Zasnovan je na sintetiziranoj sekvenciji DNA, koja se sastoji od dijela što kodira za signalni peptid CtxB, višestrukog mjesta za kloniranje u kojeg se ugrađuje gen za željeni protein, omeđenog sekvencijama za linearne epitope monoklonskih antitijela i proteaze OmpT, te mjestom cijepanja za proteazu Xa. Nakon toga slijedi optimirana sekvencija za vezni dio i β-bačvasti dio autotransportera EhaA tipa V iz bakterije Escherichia coli pod kontrolom promotora T5 induciranog pomoću spoja IPTG. Zahvaljujući cijepanju pomoću proteaze OmpT nativno prisutne u E. coli tijekom uzgoja pri 37 °C omogućena je kontinuirana sekrecija rekombinantnog proteina mCherry u sustavu MATE. Ovo je prvi dokaz da je nativna aktivnost OmpT dovoljna za sekreciju proteina ispravne konformacije, pri čemu je iz 800 mL sirovog supernatanta bakterijske kulture dobiveno 240 μg pročišćenog proteina mCherry. Budući da je za oslobađanje proteina odgovorna aktivnost proteaze OmpT, isti se plazmid može koristiti za kontinuiranu sekreciju u OmpT-pozitivnom soju ili za izlaganje proteina na površini stanice u OmpT-negativnom soju. Stoga je zaključeno da se sustav MATE može koristiti za izlaganje proteina na površini stanice i sekreciju odabranih proteina u bakteriji E. coli.

Ključne riječi

izlaganje na površini; sekrecija; mCherry; OmpT; EhaA; MATE

Hrčak ID:

145449

URI

https://hrcak.srce.hr/145449

Datum izdavanja:

10.9.2015.

Podaci na drugim jezicima: engleski

Posjeta: 2.673 *