Izvorni znanstveni članak
https://doi.org/10.17113/ftb.54.03.16.4230
Plazmidi s višestrukom antibiotičkom rezistencijom, koji se mogu upotrijebiti za kloniranje bez pojave lažnih transformanata i genetičku modifikaciju pomoću fragmenata DNA umnoženih metodom PCR
Remigiusz Arnak
; Yeast Molecular Genetics Laboratory, ICGEB, AREA Science Park, Padriciano 99, IT-34149 Trieste, Italy
Burcin Altun
; Yeast Molecular Genetics Laboratory, ICGEB, AREA Science Park, Padriciano 99, IT-34149 Trieste, Italy
Valentina Tosato
; Yeast Molecular Genetics Laboratory, ICGEB, AREA Science Park, Padriciano 99, IT-34149 Trieste, Italy
Carlo V. Bruschi
; Yeast Molecular Genetics Laboratory, ICGEB, AREA Science Park, Padriciano 99, IT-34149 Trieste, Italy
Sažetak
Konstruirali smo dva plazmida koji se mogu upotrijebiti za kloniranje, kao kalupi za inaktivaciju gena pomoću fragmenata DNA umnoženih metodom PCR, mutagenezu i konstrukciju kaseta za indukciju kromosomskih translokacija. Prema našim spoznajama ovo su prvi plazmidi koji istodobno omogućavaju selekciju bakterija na ampicilinu, kanamicinu i higromicinu, te selekciju kvasca Saccharomyces cerevisiae na geneticinu (G418) i higromicinu B. Istodobno korištenje do tri antibiotičke rezistencije omogućuje precizni odabir rekombinanata i gotovo potpunu eliminaciju lažno pozitivnih transformanata, dok jedinstvena restrikcijska mjesta olakšavaju kloniranje fragmenata DNA. Osim toga, ove smo plazmide uspješno upotrijebili kao kalupe za sintezu fragmenata DNA umnoženih metodom PCR, pomoću kojih je inducirana kromosomska translokacija u kvascu sustavom BIT (engl. bridge-induced translocation). Stanice u kojima smo potaknuli translokaciju imale su očekivane kromosomske rearanžmane i bile su rezistentne na G418 i higromicin B. Plazmidi konstruirani u ovom radu mogu se jednostavno primijeniti u mnogim molekularno-biološkim istraživanjima.
Ključne riječi
manipulacija DNA; višestruka otpornost na antibiotike; vektori s više markera; izbacivanje gena; funkcionalna analiza; kvasac
Hrčak ID:
165222
URI
Datum izdavanja:
8.9.2016.
Posjeta: 1.523 *