Kratko priopćenje
Heterologna ekspresija ksilanaze II iz plijesni Aspergillus usamii u kvascu Pichia pastoris
Chenyan Zhou
; Department of Life Science and Technology, Xinxiang Medical University, CN-453003 Xinxiang, PR China
Yongtao Wang
; The First Affiliated Hospital, Xinxiang Medical University, CN-453003 Xinxiang, PR China
Minchen Wu
; School of Medicine, Jiangnan University, CN-214122 Wuxi, PR China
Wu Wang
; School of Biotechnology, Jiangnan University, CN-214122 Wuxi, PR China
Dongfeng Li
; School of Biotechnology, Jiangnan University, CN-214122 Wuxi, PR China
Sažetak
Da bi se uspješno proizvela ksilanaza za primjenu u prehrambenoj industriji, gen koji kodira ksilanazu II (Xyn II) iz plijesni Aspergillus usamii kloniran je u vektor pPIC9K i elektroporacijom integriran u genom kvasca Pichia pastoris KM71. Rekombinantni sojevi P. pastoris (His+Muts) uzgojeni su na podlogama s minimalnom količinom dekstroze te izdvojeni pomoću PCR metode. Procjenom aktivnosti i molekularne mase enzima (SDS-PAGE metodom) utvrđeno je da je dodatak metanola inducirao ekstracelularnu ekspresiju Xyn II u kvascu P. pastoris. U pokusu na tresilici izmjerena je najveća aktivnost ksilanaze od 1760 U/mL i specifična aktivnost od 3846,83 U/mg. Optimalna pH-vrijednost za aktivnost rekombinantne Xyn II bila je 4, a optimalna temperatura 50 °C. Ksilanaza je bila stabilna na temperaturama nižim od optimalne, te u rasponu pH=3-5. Pomoću SDS-PAGE metode procijenjena je molekularna masa enzima od 21 kDa. Michaelis-ova konstantna iznosila je Km=4,55 mg/mL, maksimalna brzina reakcija bila je vmax=15,15 mM/s, a kinetička konstanta kcat=455 s-1. Aktivnost enzima potaknuta je dodatkom EDTA i Ca2+ iona, a inhibirana ionima Mn2+ i Fe2+. U radu je prvi put opisana mogućnost masovne proizvodnje proteina iz A. usamii s pomoću kvasca P. pastoris.
Ključne riječi
Aspergillus usamii; karakterizacija; ekspresija; ksilanaza; Pichia pastoris
Hrčak ID:
33059
URI
Datum izdavanja:
26.3.2009.
Posjeta: 2.047 *