Original scientific paper
https://doi.org/10.15644/asc50/2/2
Usporedba metoda ekstrakcije RNK za molekularnu analizu u oralnoj citologiji
Mônica Ghislaine Oliveira Alves
; Department of Biosciences and Oral Diagnosis, Institute of Science and Technology, UNESP - Univ Estadual Paulista, São José dos Campos, São Paulo, Brazil; School of Dentistry, Universidade Braz Cubas, Mogi das Cruzes, Brazil
Mario Pérez-Sayáns
; Oral Medicine, Oral Surgery and Implantology Unit, Faculty of Medicine and Dentistry, Santiago de Compostela, Spain
Maria-Elena Padín-Iruegas
; Human Anatomy and Embriology Area; Functional Biology and Health Sciences Department. University of Vigo, Pontevedra, Spain
Maria Dolores Reboiras-López
; Oral Medicine, Oral Surgery and Implantology Unit, Faculty of Medicine and Dentistry, Santiago de Compostela, Spain
José Manuel Suarez-Peñaranda
; Department of Pathology, Forensic Sciences, University Hospital and School of Medicine of Santiago de Compostela, Santiago de Compostela, La Coruña Spain
Rafael López-López
; Department of Medical Oncology Hospital Clinico Universitario of Santiago de Compostela, La Coruña, Spain
Celina Faig Lima Carta
; Department of Biosciences and Oral Diagnosis, Institute of Science and Technology, UNESP - Univ Estadual Paulista, São José dos Campos, São Paulo, Brazil.
Jaqueline Scholz Issa
; Smoking Cessation Program, Area of Cardiology, Heart Institute, University of São Paulo, School of Medicine, Hospital das Clínicas, São Paulo, Brazil
Abel García-García
; Oral Medicine, Oral Surgery and Implantology Unit, Faculty of Medicine and Dentistry, Santiago de Compostela, Spain
Janete Dias Almeida
; Department of Biosciences and Oral Diagnosis, Institute of Science and Technology, UNESP - Univ Estadual Paulista, São José dos Campos, São Paulo, Brazil.
Abstract
Svrha rada: Svrha istraživanja bila je usporediti tri metode ekstrakcije RNK iz oralnoga citološkog uzorka kako bi se pronašla najbolja tehnika izolacije s obzirom na koncentraciju i čistoću RNK koji se može koristiti u molekularnim testovima oralnih lezija, poput lančane reakcije polimeraze u stvarnom vremenu. Materijali i metode: Uzorci su uzeti sa sluznice oralne šupljine pacijenata bez vidljivih promjena eksfolijativnom citologijom, korištenjem četkice Orcellex Rovers Brush®. Ekstrakcija ukupnoga RNK provedena je primjenom triju metoda: 30 uzoraka ekstrahirano je primjenom sustava Trizol®, 30 sustavom Direct-zolTM RNA Miniprep i 30 sustavom RNeasy Mini Kit. Kako bi se procijenila čistoća, spektrofotometrom je izmjerena apsorpcija svjetlosti. Procijenjena koncentracija RNK dobivena je množenjem vrijednosti A260 s 40 (ng/mL). Statistička analiza obavljena je u programu GraphPad Prism
5.03. Korišteni su Studentov t-test, analiza varijance i Bonferronijev test, a razina značajnosti bila je postavljena na p ≤ 0,05. Rezultati: U skupini tretiranoj Trizolom® zabilježena je najviša prosječna koncentracija, slijedi skupina tretirana Direct-zolomTM i na kraju je RNeasy. Ako se uzmu u obzir oba korištena omjera apsorpcije, u skupini tretiranoj Direct-zolomTM izmjerena je najveća čistoća, sljedeća je skupina RNeasy pa zatim Trizol®. Zaključak: Uzimajući u obzir sve aspekte, tj. koncentraciju, čistoću i trajanje postupka, skupina tretirana Direct-zolomTM pokazala je najbolje rezultate.
Keywords
oralna sluznica; RNK, obrada uzoraka; molekularno-dijagnostičke tehnike
Hrčak ID:
160214
URI
Publication date:
20.6.2016.
Visits: 2.605 *