Izvorni znanstveni članak

https://doi.org/10.15644/asc50/2/2

Usporedba metoda ekstrakcije RNK za molekularnu analizu u oralnoj citologiji

Mônica Ghislaine Oliveira Alves ; Zavod za bioznanosti i oralnu dijagnostiku Instituta za znanost i tehnologiju (UNESP) Sveučilišta Estadual Paulista, São José dos Campos, São Paulo, Brazil; Medicinski fakultet Sveučilišta Braz Cubas, Mogi das Cruzes, Brazil
Mario Pérez-Sayáns ; Zavod za oralnu medicinu, oralnu kirurgiju i implantologiju Medicinskog i stomatološkog fakulteta, Santiago de Compostela, Španjolska
Maria-Elena Padín-Iruegas ; Područje anatomije i embriologije; Zavod za funkcionalnu biologiju i zdravstvo Sveučilišta Vigo, Pontevedra, Španjolska
Maria Dolores Reboiras-López ; Zavod za oralnu medicinu, oralnu kirurgiju i implantologiju Medicinskog i stomatološkog fakulteta, Santiago de Compostela, Španjolska
José Manuel Suarez-Peñaranda ; Zavod za patologiju i forenzične znanosti Sveučilišne bolnice i Stomatološki fakultet Santiago de Compostela, Santiago de Compostela, La Coruña, Španjolska
Rafael López-López ; Zavod za medicinsku onkologiju Sveučilišne klinike Santiago de Compostela, La Coruña, Španjolska
Celina Faig Lima Carta ; Zavod za bioznanosti i oralnu dijagnostiku Instituta za znanost i tehnologiju (UNESP) Sveučilišta Estadual Paulista, São José dos Campos, São Paulo, Brazil
Jaqueline Scholz Issa ; Program za prestanak pušenja i Područje kardiologije Kardiološkog instituta Sveučilišta São Paulo, Medicinski fakultet i Klinička bolnica, São Paulo, Brazil
Abel García-García ; Zavod za oralnu medicinu, oralnu kirurgiju i implantologiju Medicinskog i stomatološkog fakulteta, Santiago de Compostela, Španjolska
Janete Dias Almeida ; Zavod za bioznanosti i oralnu dijagnostiku Instituta za znanost i tehnologiju (UNESP) Sveučilišta Estadual Paulista, São José dos Campos, São Paulo, Brazil

Sažetak

Svrha rada: Svrha istraživanja bila je usporediti tri metode ekstrakcije RNK iz oralnoga citološkog uzorka kako bi se pronašla najbolja tehnika izolacije s obzirom na koncentraciju i čistoću RNK koji se može koristiti u molekularnim testovima oralnih lezija, poput lančane reakcije polimeraze u stvarnom vremenu. Materijali i metode: Uzorci su uzeti sa sluznice oralne šupljine pacijenata bez vidljivih promjena eksfolijativnom citologijom, korištenjem četkice Orcellex Rovers Brush®. Ekstrakcija ukupnoga RNK provedena je primjenom triju metoda: 30 uzoraka ekstrahirano je primjenom sustava Trizol®, 30 sustavom Direct-zolTM RNA Miniprep i 30 sustavom RNeasy Mini Kit. Kako bi se procijenila čistoća, spektrofotometrom je izmjerena apsorpcija svjetlosti. Procijenjena koncentracija RNK dobivena je množenjem vrijednosti A260 s 40 (ng/mL). Statistička analiza obavljena je u programu GraphPad Prism
5.03. Korišteni su Studentov t-test, analiza varijance i Bonferronijev test, a razina značajnosti bila je postavljena na p ≤ 0,05. Rezultati: U skupini tretiranoj Trizolom® zabilježena je najviša prosječna koncentracija, slijedi skupina tretirana Direct-zolomTM i na kraju je RNeasy. Ako se uzmu u obzir oba korištena omjera apsorpcije, u skupini tretiranoj Direct-zolomTM izmjerena je najveća čistoća, sljedeća je skupina RNeasy pa zatim Trizol®. Zaključak: Uzimajući u obzir sve aspekte, tj. koncentraciju, čistoću i trajanje postupka, skupina tretirana Direct-zolomTM pokazala je najbolje rezultate.

Ključne riječi

oralna sluznica; RNK, obrada uzoraka; molekularno-dijagnostičke tehnike

Hrčak ID:

160214

URI

https://hrcak.srce.hr/160214

Datum izdavanja:

20.6.2016.

Podaci na drugim jezicima: engleski

Posjeta: 3.354 *