Original scientific paper
https://doi.org/10.5513/JCEA01/17.4.1818
Optimalizácia podmienok expresie droserovej chitinázy (Drosera rotundifolia L.) v troch expresných kmeňoch E. coli
Miroslav RAJNINEC
; Institute of Plant Genetics and Biotechnology, Slovak Academy of Sciences, x, 950 07 Nitra, Slovak Republic
Jana LIBANTOVÁ
; Institute of Plant Genetics and Biotechnology, Slovak Academy of Sciences, x, 950 07 Nitra, Slovak Republic
Martin JOPČÍK
; Institute of Plant Genetics and Biotechnology, Slovak Academy of Sciences, x, 950 07 Nitra, Slovak Republic
Abstract
Rosička okrúhlolistá (Drosera rotundifolia L.), rodina Droseraceae, rod Drosera, je jednou z mála rastlinných druhov so silným antifungálnym potenciálom. Chitinázy mäsožravých rastlín zohrávajú dôležitú úlohu pri dekompozícií bunkových štruktúr obsahujúcih chitín z tela chyteného hmyzu. Bunkové steny viacerých fytopatogénnych húb obsahujú chitín, ktorý môže byť využívaný chitinázami, čo robí z rosičky okrúhlolistej zaujímavý genetický zdroj pre rastlinné biotechnológie. Cieľom práce bolo porovnanie vhodnosti použitia 3 rozdielnych expresných kmeňov E. coli (E. coli BL21-CodonPlus® (DE3)-RIPL, E. coli ArcticExpress (DE3)RIL a E. coli SHuffle® T7) pre produkciu a izoláciu heterológnej chitinázy rosičky okrúhlolistej (DrChit). Výsledky ukázali, že rekombinantný proteín bol úspešne exprimovaný vo všetkých 3 kmeňoch, ale vyskytoval sa v nerozpustnej proteínovej frakcii. Aby sa DrChit proteín dostal rozpustnej proteínovej frakcie, boli testované modifikácie teploty indukcie a koncentrácie induktora IPTG. Ďalej bolo modifikované zloženie lyzačného pufru pridaním silných neiónových detergentov, Triton® X100 a Tween® 20. Pretože tieto modifikácie nezvýšili množstvo získaného DrChit proteínu v rozpustnej frakcii, je odporúčaná jeho izolácia za denaturačných podmienok a následná obnova štruktúry proteínu.
Keywords
Drosera rotundifolia L.; expresia v Escherichia. coli; rozpustnosť proteínov
Hrčak ID:
170850
URI
Publication date:
16.12.2016.
Visits: 1.561 *