Izvorni znanstveni članak
Određivanje aktivnosti sukcinat-dehidrogenaze in situ u soju kvasca Saccharomyces cerevisiae reakcijom s plavom tetrazolijevom soli
Dorota Kregiel
; Institute of Fermentation Technology and Microbiology, Technical University of Lodz, Wolczanska 171/173, PL-90-924 Lodz, Poland
Joanna Berlowska
; Institute of Fermentation Technology and Microbiology, Technical University of Lodz, Wolczanska 171/173, PL-90-924 Lodz, Poland
Wojciech Ambroziak
; Institute of Fermentation Technology and Microbiology, Technical University of Lodz, Wolczanska 171/173, PL-90-924 Lodz, Poland
Sažetak
U ovom je istraživanju razvijen spektrofotometrijski postupak određivanja aktivnosti sukcinat-dehidrogenaze u soju Saccharomyces cerevisiae osjetljivom na azid. Propusnost stanica kvasca za 0,05 %-tni digitonin omogućila je ispitivanje enzimske aktivnosti toga soja in situ. U prisutnosti fenazin-metosulfata (kao prijenosnika elektrona) i natrijeva azida (koji inhibira enzim citokrom-oksidazu) došlo je do redukcije plave tetrazolijeve soli u plavi tetrazolijev formazan. Optimirani su razni faktori koji utječu na reakciju, kao što su: vrsta supstrata, koncentracija plave tetrazolijeve soli, broj stanica kvasca, temperatura i vrijeme inkubacije, te razni blokatori citokrom-oksidaze. U prijašnjim je istraživanjima kao najbolje otapalo za ekstrakciju plavog tetrazolijevog formazana iz stanica kvasca odabran dimetilsulfoksid. U području od 9·10^7 do 5·10^8 stanica u otopini uzorka utvrđena je linearna korelacija između gustoće permeabiliziranih stanica kvasca i količine nastalog formazana. Pri količini manjoj od 10^7 stanica kvasca vrijednosti apsorbancije bile su premale za precizno utvrđivanje prisutnosti formazana. Ovaj standardni postupak omogućuje procjenu aktivnosti sukcinat-dehidrogenaze u cijelim stanicama, zavisno od vitalnosti kvasaca. Tijekom odvijanja pokusa ustanovljen je značajan porast aktivnosti sukcinat-dehidrogenaze zbog povećanja aktivnosti soja izazvane njegovom prilagodbom uvjetima uzgoja.
Ključne riječi
sukcinat-dehidrogenaza; Saccharomyces cerevisiae; enzimska aktivnost in situ; plava tetrazolijeva sol
Hrčak ID:
30413
URI
Datum izdavanja:
17.11.2008.
Posjeta: 8.692 *