Izvorni znanstveni članak
Inhibicija supstrata za proizvodnju tirozinaze s pomoću gljive Lentinula boryana (Berk. & Mont.) Pegler prekurzorom dopamina (L-DOPA)
Rodrigo Otávio de Faria
; Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Paraná, Cx. P. 19046, Centro Politécnico, Curitiba 81531-990, Paraná, Brazil
Vivian Rotuno Moure
; Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Paraná, Cx. P. 19046, Centro Politécnico, Curitiba 81531-990, Paraná, Brazil
Wellington Balmant
; Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Paraná, Cx. P. 19046, Centro Politécnico, Curitiba 81531-990, Paraná, Brazil
Maria Angela Lopes de Almeida Amazonas
; Centro Nacional de Pesquisa de Florestas, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária – Embrapa Florestas, Cx. P. 319 Colombo 83411-000, Paraná, Brazil
Nadia Krieger
; Departamento de Química, Universidade Federal do Paraná, Cx. P. 19081, Centro Politécnico, Curitiba 81531-990, Paraná, Brazil
David Alexander Mitchell
orcid.org/0000-0001-9355-5520
; Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Paraná, Cx. P. 19046, Centro Politécnico, Curitiba 81531-990, Paraná, Brazil
Sažetak
Provedena je preliminarna karakterizacija tirozinaze proizvedene brazilskim sojem gljive Lentinula boryana, radi procjene moguće primjene u biotehnologiji. Enzim je po mnogo čemu sličan tirozinazama drugih gljiva. Nakon karakterizacije sirovog ekstrakta, aktivnost tirozinaze bila je optimalna pri pH=6 i ne osobito termostabilna, s poluvremenom raspada od 10 i 1 min pri 50 i 60 °C. Enzim je pročišćen taloženjem pomoću amonijeva sulfata i ionskom kromatografijom na koloni DEAE-sefaroze, s prinosom od 33 % i faktorom obogaćivanja od 5,3. Primjenom metode SDS-PAGE dobivene su 3 trake pročišćenoga proizvoda, molekularne mase od 20, 27 i 47 kDa. Pokazatelji kinetike inhibicije supstrata tog proizvoda s L-DOPA (3,4-dihidroksi-L-fenilalaninom) iznosili su KM=1.9 mM i KI=72 mM. U istim uvjetima reakcije tirozinaza iz komercijalnih gljiva ponašala se prema Michaelis-Mentenovom modelu s vrijednošću KM=0,51 mM. Iako ovim istraživanjem nije ustanovljeno da je tirozinaza iz gljive L. boryana najprikladnija za biotehnološku primjenu, ipak je pridonijelo spoznajom da L-DOPA utječe na inhibiciju supstrata enzima, što dosad nije bilo poznato.
Ključne riječi
tirozinaza; Lentinula boryana; inhibicija supstrata; 3,4-dihidroksi-L-fenilalanin; L-DOPA
Hrčak ID:
24181
URI
Datum izdavanja:
14.9.2007.
Posjeta: 2.401 *