Izvorni znanstveni članak
Kloniranje, funkcionalna ekspresija i karakterizacija L-asparaginaze II iz E. coli MTCC 739
Jalaja Vidya
; Biotechnology Division, National Institute for Interdisciplinary Science and Technology (NIIST), 695 019 Trivandrum, India
Ushasree Mrudula Vasudevan
; Biotechnology Division, National Institute for Interdisciplinary Science and Technology (NIIST), 695 019 Trivandrum, India
Carlos Ricardo Soccol
; Bioprocess Engineering and Biotechnology Division, Federal University of Paraná (UFPR), P.O. Box 19011, CEP 81531-970 Curitiba, PR, Brazil
Ashok Pandey
orcid.org/0000-0003-1626-3529
; Biotechnology Division, National Institute for Interdisciplinary Science and Technology (NIIST), 695 019 Trivandrum, India
Sažetak
L-asparaginaza je antineoplastični agens koji selektivno smanjuje razinu L-asparaginaze u krvi i sprečava proliferaciju kanceroznih stanica. L-asparaginaze iz bakterije Escherichia coli koriste se za klinička ispitivanja zbog njihove specifičnosti za supstrat i ograničene aktivnosti glutaminaze. Gen ansB za kodiranje L-asparaginaze II izoliran je iz E. coli MTCC 739, kloniran pomoću pelB sekvencije prokariotskog vektora pET20b i izražen u stanicama E. coli DE3. Pojačana je ekspresija rekombinantnog proteina postignuta pomoću 10 μM izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozidaze, pri čemu je izraženi protein bio topljiv, a na C završetku imao je heksahistidinsku oznaku. Rekombinirani je protein pročišćen kromatografijom pomoću nikal(II)-nitrilotrioctene kiseline. Ispitani su ovi parametri: optimalna temperatura i pH-vrijednost za aktivnost enzima, te utjecaj temperature na njegovu stabilnost. Utvrđeno je da je pročišćeni protein imao optimalnu aktivnost pri 37 °C i pH=6.
Ključne riječi
funkcionalna ekspresija; L-asparaginaza II; svojstva enzima
Hrčak ID:
71053
URI
Datum izdavanja:
10.8.2011.
Posjeta: 3.606 *