Skip to the main content

Original scientific paper

Kloniranje, funkcionalna ekspresija i karakterizacija L-asparaginaze II iz E. coli MTCC 739

Jalaja Vidya ; Biotechnology Division, National Institute for Interdisciplinary Science and Technology (NIIST), 695 019 Trivandrum, India
Ushasree Mrudula Vasudevan ; Biotechnology Division, National Institute for Interdisciplinary Science and Technology (NIIST), 695 019 Trivandrum, India
Carlos Ricardo Soccol ; Bioprocess Engineering and Biotechnology Division, Federal University of Paraná (UFPR), P.O. Box 19011, CEP 81531-970 Curitiba, PR, Brazil
Ashok Pandey orcid id orcid.org/0000-0003-1626-3529 ; Biotechnology Division, National Institute for Interdisciplinary Science and Technology (NIIST), 695 019 Trivandrum, India


Full text: english pdf 299 Kb

page 286-290

downloads: 2.677

cite


Abstract

L-asparaginaza je antineoplastični agens koji selektivno smanjuje razinu L-asparaginaze u krvi i sprečava proliferaciju kanceroznih stanica. L-asparaginaze iz bakterije Escherichia coli koriste se za klinička ispitivanja zbog njihove specifičnosti za supstrat i ograničene aktivnosti glutaminaze. Gen ansB za kodiranje L-asparaginaze II izoliran je iz E. coli MTCC 739, kloniran pomoću pelB sekvencije prokariotskog vektora pET20b i izražen u stanicama E. coli DE3. Pojačana je ekspresija rekombinantnog proteina postignuta pomoću 10 μM izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozidaze, pri čemu je izraženi protein bio topljiv, a na C završetku imao je heksahistidinsku oznaku. Rekombinirani je protein pročišćen kromatografijom pomoću nikal(II)-nitrilotrioctene kiseline. Ispitani su ovi parametri: optimalna temperatura i pH-vrijednost za aktivnost enzima, te utjecaj temperature na njegovu stabilnost. Utvrđeno je da je pročišćeni protein imao optimalnu aktivnost pri 37 °C i pH=6.

Keywords

funkcionalna ekspresija; L-asparaginaza II; svojstva enzima

Hrčak ID:

71053

URI

https://hrcak.srce.hr/71053

Publication date:

10.8.2011.

Article data in other languages: english

Visits: 4.061 *